1981年9月开始步入影艺界，1986年王伯昭去了美国发展。九十年代，在海外接演李安导演的《推手》

1982年，王伯昭出演人生中第一部影片《笔中情》，因在剧中有不错的表现，该电影也成为王伯昭的成名作。在这部以年轻书法家的爱情为题材的古装片里，王伯昭扮演的书法家赵旭之的名字分别取自三位历史上著名书法家的姓名：赵孟頫、张旭、王羲之。

1984年，王伯昭与演员六小龄童、马德华合作出演了经典电视剧《西游记》，因在剧中饰演白龙马人型被大多数观众所认识。同年，与演员高维明、谢芳分别合作出演电影《一个女人的命运》、《清水湾，淡水湾》，在剧中饰演黄立秋和小张。

1986年，王伯昭接连出演电影《侠女十三妹》、《文成公主》和电视剧《不知其名》，并在剧中有不错表现。

1991年，王伯昭与李安导演合作，出演电影《推手》，该剧围绕一个移民美国家庭发生的一系列故事，表现了传统的中国文化与美国的风土人情之间的冲突。

1994年，王伯昭与演员林俊贤合作出演古装电视剧《唐太宗李世民》，在剧中饰演李建成。

1997年，王伯昭与张国立，陈亚兰，苏有朋，陈志朋等多位演员合作主演古装爱情电视剧《一品夫人芝麻官》。

1999年，王伯昭出演电视剧《春光灿烂猪八戒》，在剧中饰演玉皇大帝。同年6月，与张晨光、于佳卉合作出演电视剧《王宝钏与薛平贵》，在剧中饰演盖世文。

2002年，王伯昭在由张恨水同名小说改编的民国爱情剧《金粉世家》饰演白雄起。该剧讲述了十九世纪二十年代，北洋军阀内阁总理之子金燕西和清贫女子冷清秋之间的爱情故事。。

2004年，王伯昭与演员张卫健、谢霆锋合作出演古装电视剧《小鱼儿与花无缺》，在剧中饰演江别鹤。

2005年，由《金粉世家》原创班底打造的电视剧《金色年华》开播，王伯昭与吴竞、黄梅莹、舒耀瑄等演员合作，在剧中饰演许洪均。

2006年，王伯昭参演电视剧《局中局》，剧中扮演方立新。。

2010年，王伯昭与演员陈浩民、寇振海合作出演电视剧《秦香莲》，在剧中饰演陈恂。

2011年，王伯昭在《命运交响曲》中饰演宋承昊（迟帅饰）的父亲宋礼源，剧中二人将上演多场“剑拔弩张”的对手戏，此次是王伯昭与迟帅继《新京城四少》后，再次合作扮演父子。

2012年，王伯昭与沈星浩、李宝能导演合作，出演电视剧《同在屋檐下》，剧中饰演洛铭。同年，与李璟、李东恒等青年偶像演员合作出演电视剧《铁血男儿夏明翰》，剧中饰演章府老爷章炎，面对章承基、章妙菱（苏青饰）一双儿女皆被夏明翰搅的反目成仇，疼惜怜悯与恨铁不成钢的矛盾心理让他一次次陷入不仁不义。

2013年，王伯昭参演由导演马功伟执导电视剧《更年期的战争》，该剧讲述了一位从海外留学归来的青年才俊任何与女强人母亲之间的情感碰撞和摩擦。

2014年，纪念邓小平诞辰110周年的电视剧《历史转折中的邓小平》在央视一套开播。该剧讲述1976年-1984年这段重要历史时期。王伯昭在剧中饰演荣毅仁。

王伯昭不仅在演技方面表现出色，而且还擅长书法。闲暇之余，潜心笔墨，颇有成就。在自己首部电影《笔中情》中扮演男主角赵旭之，将自己书写的“飞舞”二字，呈现在观众面前，也展示了他在书法领域的造诣。其书写的大字浑厚有力、一掷千钧；小字秀丽挺拔、气韵流畅，有不错的艺术价值。

徐少华回忆说，尽管戏份少，王伯昭在饰演小白龙时却没少下功夫，吃了很多苦。因为有很多武戏，王伯昭在武师(《西游记》中二郎神的扮演者)的指导下苦练功夫，认真琢磨每一招每一式，很多时候都是别人拍摄完了他还在练习。20年过去了，《西游记》还是众多电视台寒暑假的保留剧目，对此，王伯昭感叹自己很幸运能在这样一部具有恒久生命力的电视剧中出演角色，并笑着对身边的徐少华说：“你该知足了，一个唐僧让你辉煌了一辈子。”

据了解，在《跟年期的战争》第一集中，王伯昭就有不少戏份，他透露到，他第一个面对的就是一个非常难缠的有更年期症状的女人，至于到底是谁，发生了什么，王伯昭则闭口不谈。导演马功伟也对王伯昭的演技大加肯定，“王老师演了很多年戏了，早就是一名戏骨了，在现场根本不用我指导，而且还会指导其他年轻演员演戏，非常专业”。

2004年9月，在怀柔拍摄电视剧《小鱼儿与花无缺》的过程中，王伯昭认为张卫健、谢霆锋假戏真做，故意殴王伯昭被打打了他，致使其多处受伤。被打伤者王伯昭将委托其代理人北京京都律师事务所的吴昊、张振祖两位律师，正式向北京市第二中级人民法院递交起诉书，以谢霆锋等两被告侵权为由，请求法院判令谢霆锋、张卫健向王伯昭公开书面赔礼道歉；要求两被告共同赔偿王伯昭经济损失3万元；被告张卫健赔偿原告精神损失60万元，被告谢霆锋赔偿原告精神损失40万元。

王伯昭在他的起诉书中说：他和被告张卫健、谢霆锋都是电视剧《小鱼儿与花无缺》剧组演员。2004年9月18日19时许，在实际拍摄过程中，两被告经过策划和预谋，借表演名义，共同故意对他进行殴打，致使他左大腿、左肾、左面部等多处受伤，造成频发性心房早搏。根据北京市公安局法医鉴定中心出具的伤检《鉴定书》鉴定：左大腿软组织挫伤青紫面积大腿外侧1.5手掌大小，左膝上方1手掌大小，左大腿内侧1手掌大小，左肾轻度挫伤，左面部软组织损伤，”参照人体损伤鉴定标准的有关规定符合轻微伤（上限）”。

对于剧情需要是否可以成为谢霆锋、张卫健打伤王伯昭而不承担法律责任的理由，中国人民大学民法学教授赵中孚在接受记者采访时表示，人身权是《宪法》赋予公民的基本权利，剧情的需要不能作为侵犯公民人身权的借口，任何一个领域也不能豁免对人的伤害责任。中国政法大学教授阮齐林认为，从本案法医鉴定书的损害后果看，至少两被告存在严重过失。

2005年12月，王伯昭拍戏被打一案，由北京市第二中级人民法院进行公开宣判。法院认定被告张卫健、谢霆锋在民事上有重大过失，但由于王伯昭未能提供相关经济损失及精神损害的证据，故驳回原告王伯昭的诉讼请求。12月30日，王伯昭发声明表示对法庭判决基本认同。至此，这场沸沸扬扬的拍戏打人致伤，引起全国关注的案件也告终了。